www.999120.net
Application of time-resolved fluoroimmunoassay in the detection of HBV markers. LUO Kai-zhong, YANG Xu, SU Xian-shi, XU Yun, LI Liang-you.
【Key words】 Hepatitis B virus; Polymerase chain reaction; Enzyme-linked immunosorbent assay; Fluoroimmunoassay, time-resolved
【First author抯 address】 Liver Diseases Research Center, Second Xiangya Hospital, Central South University, Changsha 410011, China
临床工作中发现少部分经酶联免疫吸附法（ELISA）检测仅乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和抗-HBc IgG阳性的患者，病毒含量却很高。为此，采用时间分辨免疫荧光分析法（TRF）对34例此类患者进行乙型肝炎标志物（HBV M）的检查，现将结果报道如下。
一、资料与方法
1. 病例选择：为2002年2月至9月住院或门诊患者，共34例，男21例，女13例，年龄5～58岁，平均（29.2±18.7）岁。采静脉血分离血清，用ELISA进行HBV标志物（HBV M）检测及HBV DNA定量检查。留取血清置-30℃保存。(1)HBsAg、抗-HBc IgG阳性，乙型肝炎e抗原（HBeAg）、抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc IgM阴性；(2)HBV DNA含量＞104拷贝/ml；(3)近3个月未使用抗病毒药物。每人进行2次抗原抗体检查，结果一致。2次HBV DNA检查，结果相差1个数量级以下。
2. 常规HBV M检测：用ELISA法，试剂为上海科华生物工程股份有限公司产品，按产品说明书操作。
3. HBV DNA含量测定：采用实时荧光定量PCR法，试剂盒购自广州中山医科大学达安基因诊断中心。仪器为美国Perkin Elmer公司GeneAmp甈E5700型PCR仪。严格按说明书操作，检测灵敏度为103拷贝/ml。
4. TRF法检查HBV M：试剂为上海新波生物技术有限公司产品，采用Anytest2000时间分辨检测仪。严格按照产品说明书操作。
5. 统计分析：取HBV DNA含量的对数值进行成组设计的两样本均数比较，行t检验。
二、结果
1.HBV M：用TRF法检查发现，34例患者中HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性者15例，HBsAg、抗-HBe、抗-HBc均阳性者14例，仅HBsAg、抗-HBc阳性者5例。即用ELISA检查时HBeAg假阴性15例，抗-HBe假阴性14例(表1)。
表1 时间分辨免疫荧光发析法检测乙型肝炎标志物结果(x-±s)
乙型肝炎标志物 参考值 样本数 浓度 阳性例数 阳性率(%)
乙型肝炎表面抗原 0～0.5ng/ml 34 279.19±61.62 34 100.0
乙型肝炎表面抗体 0～10mU/ml 34 2.21± 5.60 0 0
乙型肝炎e抗原 0～0.03Ncu/ml 34 0.15± 0.13 15 44.1
乙型肝炎e抗体 0～1.5Ncu/ml 34 2.86± 1.29 14 41.2
乙型肝炎c抗体 0～0.1Ncu/ml 34 11.83± 4.79 34 100.0
2.HBV DNA含量：HBeAg及抗-HBc均阴性组、HBeAg阳性组、抗-HBc阳性组HBV DNA含量的对数平均值分别为6.45±1.74、7.29±1.59、5.80±1.46。将前者与后两组分别进行成组设计的两样本均数比较的t检验，t值分别为1.005、0.816，P值均>0.05，差异无显著性。
三、讨论
HBV M的变化是评估HBV感染后病情转归的重要依据，也是抗病毒治疗的疗效考核指标之一。通过TRF检查发现，大部分ELISA法检测为HBsAg、抗-HBc阳性模式的患者其实为HBeAg假阴性（15/34，44.12%）及抗-HBe假阴性（14/34，41.18%）。仅少部分可能为病毒变异的结果。研究发现，HBsAg、抗-HBc浓度显著高于正常，ELISA及TRF符合率为100%，抗-HBs浓度明显低于正常，两者符合率为100%。而HBeAg、抗-HBe浓度仅稍高于正常，因此ELISA易出现假阴性。目前TRF主要用于激素的检测。随着仪器及试剂的国产化，检测费用的降低，TRF因其突出的高敏感性、特异性强、无放射污染等特点，在HBV M的检测中有着广泛的应用前景。
|
